Kontaminasi Kultur Sél Éféktif Ngurangan

Kontaminasi kultur sél tiasa janten masalah anu paling umum di laboratorium kultur sél, sakapeung nyababkeun akibat anu parah pisan.Kontaminasi kultur sél bisa dibagi jadi dua kategori, pangotor kimiawi kayaning sedeng, sérum jeung najis cai, éndotoksin, plasticizers jeung detergents, sarta rereged biologis kayaning baktéri, molds, yeasts, virus, mycoplasmas cross inféksi.Kacemar ku garis sél lianna.Sanajan mustahil pikeun ngaleungitkeun kontaminasi lengkep, frékuénsi sareng parahna tiasa dikirangan ku cara ngartos sumberna sareng nuturkeun téknik aseptik anu saé.

1.Bagian ieu outlines jenis utama kontaminasi biologis:
Kontaminasi baktéri
Kapang sareng kontaminasi virus
Kontaminasi Mycoplasma
Kontaminasi ragi

1.1 Kontaminasi baktéri
Baktéri mangrupikeun sakelompok ageung mikroorganisme sél tunggal dimana-mana.Aranjeunna biasana ngan sababaraha microns diaméterna sarta bisa datang dina rupa-rupa wangun, ti spheres ka rod na spirals.Kusabab ubiquity maranéhanana, ukuran, jeung laju tumuwuh gancang, baktéri, babarengan jeung ragi jeung kapang, mangrupakeun pangotor biologis paling umum dina budaya sél.

1.1.1 Deteksi Kontaminasi Baktéri
Kontaminasi baktéri gampang dideteksi ku pamariksaan visual budaya dina sababaraha dinten saatos katépaan;
Budaya anu kainféksi biasana katingali mendung (nyaéta, keruh), sakapeung aya pilem ipis dina beungeut cai.
Serelek ngadadak dina pH medium kultur ogé sering kapendak.
Dina mikroskop kakuatan-rendah, baktéri muncul salaku granules leutik, pindah antara sél, sarta observasi dina mikroskop kakuatan tinggi bisa ngabéréskeun wangun baktéri individu.

1.2 Kapang & kontaminasi Virus
1.2.1 Kontaminasi kapang
Kapang nyaéta mikroorganisme eukariot tina karajaan jamur anu tumuwuh dina bentuk filamén multisélular anu disebut hifa.Jaringan konéktif tina filamén multisélél ieu ngandung inti idéntik genetik anu disebut koloni atanapi miselium.

Sarupa jeung kontaminasi ragi, pH budaya tetep stabil salila fase awal kontaminasi lajeng ngaronjat gancang salaku budaya jadi leuwih parah kainféksi sarta jadi mendung.Dina mikroskop, miselium biasana filamén, sakapeung salaku klaster spora padet.Spora tina loba kapang bisa salamet dina lingkungan pisan kasar jeung teu ramah salila fase dormant maranéhanana sarta diaktipkeun ngan lamun kaayaan tumuwuhna katuhu anu encountered.

1.2.2 Kontaminasi Virus
Virus mangrupikeun agén inféksi mikroskopis anu nyandak alih mesin sél inang pikeun réproduksi.Ukuranana anu leutik pisan ngajadikeun aranjeunna hésé dideteksi dina budaya sareng dipiceun tina réagen anu dianggo di laboratorium kultur sél.Kusabab sabagéan ageung virus gaduh syarat anu ketat pisan pikeun hostna, aranjeunna biasana henteu mangaruhan kultur sél spésiés lian ti inangna.
Nanging, pamakean budaya sél anu kainféksi virus tiasa nyababkeun résiko anu serius pikeun kaséhatan tanaga laboratorium, khususna upami sél manusa atanapi primata tumbuh di laboratorium.

Inféksi virus dina kultur sél tiasa dideteksi ku mikroskop éléktron, immunostaining sareng sakumpulan antibodi, ELISA, atanapi PCR sareng primer virus anu pas.

1.3 Kontaminasi Mycoplasma
Mycoplasmas mangrupakeun baktéri basajan tanpa dinding sél, sarta aranjeunna dianggap organisme pangleutikna réplikasi diri.Kusabab ukuranana leutik pisan (biasana kirang ti 1 micron), mycoplasma hese dideteksi dugi ka ngahontal dénsitas anu luhur pisan sareng nyababkeun kultur sél rusak;Nepi ka harita, biasana henteu aya tanda inféksi anu jelas.

1.3.1 Deteksi kontaminasi mycoplasma
Sababaraha mycoplasmas tumuwuh laun bisa persist dina budaya tanpa ngabalukarkeun maot sél, tapi aranjeunna ngarobah paripolah jeung métabolisme sél host dina budaya.

Inféksi mycoplasma kronis tiasa dicirikeun ku panurunan laju proliferasi sél, panurunan dénsitas jenuh sareng aglutinasi dina budaya gantung.
Tapi, hiji-hijina cara anu bisa dipercaya pikeun ngadeteksi kontaminasi mycoplasma nyaéta nguji budaya sacara rutin nganggo pewarnaan fluoresensi (contona, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immunostaining, autoradiografi, atanapi uji mikroba.

1.4 Kontaminasi ragi
Ragi nyaéta eukariota bersel tunggal tina karajaan jamur, ukuranana mimitian ti sababaraha mikron (biasana) dugi ka 40 mikron (jarang).

1.4.1 Pangdeteksi kontaminasi ragi
Sapertos kontaminasi baktéri, kabudayaan anu kacemar ku ragi tiasa janten mendung, khususna upami kontaminasi dina tahap anu maju.pH budaya kacemar ku ragi robah pisan saeutik nepi ka kontaminasi jadi leuwih parna, di mana tahap pH biasana naek.Dina mikroskop, ragi némbongan salaku partikel ovoid atanapi buleud individu sareng tiasa ngahasilkeun partikel anu langkung alit.

2. Inféksi cross
Sanaos henteu biasa sapertos kontaminasi mikroba, kontaminasi silang éksténsif tina seueur garis sél sareng HeLa sareng garis sél anu ngembang gancang sanés mangrupikeun masalah anu jelas sareng akibat anu serius.Kéngingkeun garis sél tina bank sél anu terhormat, pariksa rutin karakteristik garis sél, sareng nganggo téknik aseptik anu saé.Prakték ieu bakal ngabantosan anjeun ngahindarkeun kontaminasi silang.Sidik DNA, karyotyping sareng isotyping tiasa mastikeun naha aya kontaminasi silang dina budaya sél anjeun.

Sanaos henteu biasa sapertos kontaminasi mikroba, kontaminasi silang éksténsif tina seueur garis sél sareng HeLa sareng garis sél anu ngembang gancang sanés mangrupikeun masalah anu jelas sareng akibat anu serius.Kéngingkeun garis sél tina bank sél anu terhormat, pariksa rutin karakteristik garis sél, sareng nganggo téknik aseptik anu saé.Prakték ieu bakal ngabantosan anjeun ngahindarkeun kontaminasi silang.Sidik DNA, karyotyping sareng isotyping tiasa mastikeun naha aya kontaminasi silang dina budaya sél anjeun.