Salah sahiji kaunggulan utama kultur sél nyaéta kamampuhan pikeun ngamanipulasi kimia fisik réproduksi sél (ie suhu, pH, tekanan osmotic, tegangan O2 jeung CO2) jeung lingkungan fisiologis (ie konsentrasi hormon jeung gizi).Salian suhu, lingkungan budaya dikawasa ku medium pertumbuhan.
Sanajan lingkungan fisiologis budaya teu jelas sakumaha lingkungan fisik jeung kimia na, pamahaman hadé komponén sérum, idéntifikasi faktor pertumbuhan diperlukeun pikeun proliferasi, sarta pamahaman hadé tina microenvironment sél dina budaya.(Ie interaksi sél-sél, difusi gas, interaksi jeung matriks) ayeuna ngamungkinkeun garis sél tangtu bisa berbudaya dina média sérum bébas.
1.Culture lingkungan mangaruhan tumuwuhna sél
Perhatikeun yén kaayaan kultur sél béda pikeun unggal jinis sél.
Konsékuansi tina nyimpang tina kaayaan budaya diperlukeun pikeun tipe sél tinangtu rupa-rupa ti ekspresi phenotypes abnormal nepi ka gagalna lengkep kultur sél.Ku alatan éta, kami nyarankeun yén anjeun jadi akrab jeung garis sél anjeun resep tur mastikeun turutan parentah disadiakeun pikeun tiap produk nu Anjeun pake dina percobaan Anjeun.
2.Precautions pikeun nyieun hiji lingkungan kultur sél dioptimalkeun pikeun sél anjeun:
Média budaya sareng sérum (tingali di handap pikeun inpormasi anu langkung lengkep)
Tingkat pH sareng CO2 (tingali di handap kanggo inpormasi lengkep)
Budidaya plastik (tingali di handap kanggo inpormasi lengkep)
Suhu (tingali di handap kanggo inpormasi lengkep)
2.1 Média Budaya jeung Sérum
Médium kultur mangrupikeun bagian anu paling penting dina lingkungan budaya, sabab nyayogikeun gizi, faktor pertumbuhan sareng hormon anu dipikabutuh pikeun kamekaran sél, sareng ngatur pH sareng tekanan osmotik budaya.
Sanajan percobaan kultur sél awal anu dipigawé maké média alam dicandak ti extracts jaringan jeung cairan awak, kabutuhan standarisasi, kualitas média, sarta ngaronjat paménta ngarah ka ngembangkeun média definitif.Tilu jinis média dasar nyaéta média basal, média sérum réduksi sareng média bébas sérum, sareng aranjeunna gaduh syarat anu béda pikeun suplement sérum.
2.1.1 Média dasar
Médium kultur sél Gibco
Seuseueurna garis sél tumbuh saé dina média dasar anu ngandung asam amino, vitamin, uyah anorganik, sareng sumber karbon (sapertos glukosa), tapi formulasi média dasar ieu kedah ditambah ku sérum.
2.1.2 Ngurangan sedeng sérum
Botol kalawan Gibco Low Sérum Medium
Strategi séjén pikeun ngurangan épék ngarugikeun sérum dina percobaan kultur sél nyaéta ngagunakeun média sérum-réduksi.Médium sérum ngurangan nyaéta rumus médium dasar anu beunghar ku gizi sareng faktor turunan sato, anu tiasa ngirangan jumlah sérum anu diperyogikeun.
2.1.3 Serum bébas sedeng
Botol sareng sedeng bébas sérum Gibco
Serum bébas sedeng (SFM) circumvents pamakéan sérum sato ku ngaganti sérum ku gizi luyu jeung formulasi hormon.Seueur budaya primér sareng garis sél gaduh formulasi sedeng bébas sérum, kalebet jalur produksi protéin rekombinan Hamster Ovary Cina (CHO), rupa-rupa garis sél hibridoma, garis serangga Sf9 sareng Sf21 (Spodoptera frugiperda), ogé pikeun host pikeun produksi virus. (Contona, 293, VERO, MDCK, MDBK), jsb Salah sahiji kaunggulan utama ngagunakeun sedeng sérum bébas nyaéta kamampuhan pikeun nyieun sedeng selektif pikeun jenis sél husus ku milih kombinasi luyu faktor pertumbuhan.Tabel di handap ieu daptar kaunggulan sareng kalemahan média bébas sérum.
Kauntungan
Ningkatkeun kajelasan
Kinerja anu langkung konsisten
Pemurnian anu langkung gampang sareng pamrosésan hilir
Akurat meunteun fungsi sél
Ningkatkeun produktivitas
Kontrol réaksi fisiologis anu langkung saé
deteksi média sél ditingkatkeun
Kakurangan
Sél tipe husus syarat rumus sedeng
Peryogi kamurnian réagen anu langkung luhur
Slowdown dina tumuwuhna
2.2.1 tingkat pH
Paling garis sél mamalia normal tumuwuh ogé dina pH 7,4, sarta béda antara garis sél béda leutik.Sanajan kitu, sababaraha garis sél robah geus ditémbongkeun tumuwuh hadé dina lingkungan rada asam (pH 7.0 - 7.4), bari sababaraha garis sél fibroblast normal resep lingkungan rada basa (pH 7.4 - 7.7).Garis sél serangga sapertos Sf9 sareng Sf21 tumbuh pangsaéna dina pH 6,2.
2.2.2 tingkat CO2
Médium tumuwuhna ngadalikeun pH budaya jeung buffers sél dina budaya pikeun nolak parobahan pH.Biasana, panyangga ieu dihontal ku ngandung panyangga organik (contona, HEPES) atanapi CO2-bikarbonat.Kusabab pH medium gumantung kana kasaimbangan hipu karbon dioksida (CO2) jeung bikarbonat (HCO3-), parobahan CO2 atmosfir bakal ngarobah pH medium.Ku alatan éta, nalika ngagunakeun medium buffered kalawan CO2-bikarbonat basis panyangga, perlu ngagunakeun CO2 exogenous, utamana lamun culturing sél dina masakan kabuka budaya atawa culturing garis sél robah warna ka warna dina konsentrasi luhur.Sanajan lolobana panalungtik biasana ngagunakeun 5-7% CO2 dina hawa, lolobana percobaan kultur sél biasana ngagunakeun 4-10% CO2.Nanging, unggal médium gaduh tegangan CO2 sareng konsentrasi bikarbonat anu disarankeun pikeun ngahontal pH sareng tekanan osmotik anu leres;pikeun inpo nu leuwih lengkep, mangga tingal parentah produsén sedeng urang.
2.3 Budidaya plastik
Plastik kultur sél sayogi dina rupa-rupa bentuk, ukuran sareng permukaan pikeun nyocogkeun kana sababaraha aplikasi kultur sél.Anggo pituduh permukaan plastik kultur sél sareng pituduh wadah kultur sél di handap pikeun ngabantosan anjeun milih plastik anu pas pikeun aplikasi kultur sél anjeun.
Tingali sadaya plastik kultur sél Thermo Scientific Nunc (tumbu iklan)
2.4 Suhu
Suhu optimal pikeun kultur sél gumantung pisan kana suhu awak host dimana sél diisolasi, sareng sakedik kana parobahan anatomis dina suhu (contona, suhu kulit tiasa langkung handap tibatan otot rangka. ).Pikeun kultur sél, Overheating mangrupikeun masalah anu langkung serius tibatan overheating.Ku alatan éta, suhu dina incubator biasana diatur rada handap suhu optimum.
2.4.1 Suhu optimum pikeun sagala rupa garis sél
Paling garis sél manusa jeung mamalia disimpen dina 36 ° C nepi ka 37 ° C pikeun tumuwuh optimal.
Sél serangga dibudidayakeun dina suhu 27 ° C pikeun tumuwuh optimal;tumuwuh leuwih laun dina suhu handap sarta suhu antara 27 ° C jeung 30 ° C.Di luhur 30 ° C, vitalitas sél serangga ngurangan, sanajan eta balik deui ka 27 ° C, sél moal cageur.
Garis sél avian peryogi 38,5 ° C pikeun ngahontal pertumbuhan maksimal.Sanajan sél ieu bisa diteundeun dina 37 ° C, maranéhna bakal tumuwuh leuwih laun.
Garis sél anu diturunkeun tina sato berdarah tiis (sapertos amfibi, lauk cai tiis) tiasa toléran suhu anu lega tina 15 ° C dugi ka 26 ° C.
waktos pos: Feb-01-2023